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本试剂盒能够高效地从杆状病毒感染的悬浮或贴壁培养的Sf9、Sf21等细胞系中提取可溶性蛋白质，该试剂采用温和的非离子型去污试剂和盐以及缓冲试剂以增强提取效率和蛋白质的稳定性。提取的可溶性蛋白保持了蛋白质的原有功能，可以用于HIS或GST标签蛋白质纯化，离子交换色谱，酶免分析(Western blot、ELISA、RIA)，Pull down，EMSA，1D和2D电泳等，也可以用于报告基因(Galactosidase、Luciferase、Chloramphenicol Acetyltransferase等)和蛋白激酶(PKC、PKA、Tyrosine Kinase等)的酶活性分析。

• 采用温和的非离子型去污试剂高效提取可溶性蛋白，提取效率高于传统的超声法；
  
• 提取液可以透析去除非离子型去污试剂，或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。

• 所有的试剂及器具均需预冷后使用，以保证蛋白质的完整性。
  
• 如果需要，可以在提取试剂中加入终浓度为5mM的EDTA，但是由于EDTA会破坏Ni-NTA树脂，所以这时就不能够再用于HIS标签重组蛋白质纯化。
  
• 如果需要请在实验前在抽提试剂中加入1倍浓度的我司产的磷酸酶抑制试剂(产品编号GS1415或GS1416或GS1417)，再进行昆虫细胞蛋白质的提取。
  
• 对于提取的蛋白质，可以采用我司生产的改良型BCA法蛋白质浓度定量试剂盒(GS1483)或非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒(GS1485)或改良型Lowry法蛋白质浓度定量试剂盒(GS1487)对提取样品中的蛋白质进行定量。
  
• 如果该提取液用于2D电泳，请将所提取的样品用10倍的2D样品溶解液(GS1433~GS1438)进行稀释，再用于2D电泳。
  
• 可以使用(GS1466)Sephadex重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
  
• 如果用于蛋白质质谱研究，请用我公司生产的铜染(GS1532)或锌染(GS1534)或质谱用快速银染试剂盒(GS1419)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液(GS1479)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(GS1549)进行染色或通用型蛋白染色液(GS2027)进行染色。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 从悬浮培养的细胞中提取活性蛋白质：
  
  • 对于悬浮培养的细胞，取培养细胞5×10⁶～1×10⁷个，3000rpm (800g)离心5min，弃去培养液，细胞用预冷的1X PBS pH7.4洗涤两遍。
    
  • 加入1mL的抽提试剂(使用前每1mL抽提试剂加入1μL DTT、10μL PMSF、1μL蛋白酶抑制剂)，用枪头轻轻吹打，再以最大速度涡悬振荡10sec。
    
  • 在冰上放置10min，期间剧烈振荡3～4次，每次30sec。
    
  • 在4℃，12000rpm(12830g)离心15min，取上清，转移到一个新的预冷的1.5mL的离心管中，作为可溶性蛋白部分，-20℃保存待用，沉淀中含有不溶性蛋白和细胞碎片，以作进一步分析。
• 从单层培养的贴壁细胞中提取活性蛋白质：
  
  • 将培养板上的培养液吸去，加入相同体积的预冷的1X PBS，轻轻摇动，再吸去PBS，重复洗涤一次。
    
    • 尽量避免让单层培养的贴壁细胞产生移动，如果产生，可以先3000rpm (800g)离心5min，再用的预冷的1X PBS洗涤。
  • 按照下表加入一定体积的抽提试剂(使用前每1mL抽提试剂加入1μL DTT、10μL PMSF、1μL蛋白酶抑制剂)。
    

    板尺寸/表面积	昆虫细胞提取Buffer的体积
    100mm dish	500～1000μL
    60mm dish	250～500μL
    6-well plate	200～400μL per well
    24-well plate	100～200μL per well
    96-well plate	50～100μL per well
    T-25 flask	500μL per flask
    T-75 flask	1.5mL per flask

  • 4℃温育10min，将培养板放置在摇床上中速振荡；若是培养瓶，可以轻敲培养瓶的一边或用细胞刮刮下细胞，细胞一般5～6min后从板底脱离。
    
  • 轻轻倾斜培养板或培养瓶使裂解产物流向板或瓶的一边或一角，然后将抽提试剂、细胞及细胞碎片转移到1.5mL离心管中，在冰上静置10min，期间剧烈振荡3～4次，每次30sec。
    
  • 在12000rpm (12830g)，4℃离心5min，取上清，转移到一个新的预冷的1.5mL的离心管中，作为可溶性蛋白部分，-20℃保存待用，沉淀中含有不溶性蛋白和细胞碎片，以作进一步分析。